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七步成：恒遠(yuǎn)實驗基因合成過程方法

點擊次數(shù)：12969 發(fā)布時間：2014/2/21 10:36:16

在前面的文章中我們還說到春雨的到來，這節(jié)氣雨水后，上海市的天氣反而轉(zhuǎn)晴了。今天又是一個周五，本周的*后一個工作日，這一天一天過的真快�？吹筋}目您就知道，今天的文章還是實驗，那么下面就來看吧，只需七步成：恒遠(yuǎn)實驗基因合成過程方法。

1、將兩種寡核苷酸各1 μg加入微量離心管中，加水至17 μl，再加2 μl 的10×測序酶緩沖液。70℃加熱5 min，然后在合適的退火溫度下保溫5 min，取2 μl 留待以后的分析。

2、加2 μl 4種dNTP混合液和10 U測序酶，30℃溫育30 min。

3、70℃ 10 min 滅活DNA聚合酶，取2 μl 留待以后的分析。

4、加10×限制性內(nèi)切酶反應(yīng)緩沖液，加水和20~100 U 的適合于克隆的限制性內(nèi)切酶至100 μl。適當(dāng)?shù)臏囟认孪? h 以上。

5、酚抽提，加100 μl 4 mol/l 乙酸銨和400 μl 的無水乙醇，-70℃沉淀15 min，離心5 min，沉淀重懸于100 μl TE緩沖液，用乙醇再沉淀一次，用95%乙醇洗滌沉淀，干燥，20 μl TE緩沖液溶解，取2 μl 用于以后的分析。

6.、用篩分型瓊脂糖凝膠電泳分析確證原材料、延伸產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物，估計延伸的寡核苷酸的量，再用適當(dāng)?shù)妮d體亞克隆。

7、對幾個合適的亞克隆測序。

以上為本次文章的中心實驗步驟啦，雖然雨水停了，但是現(xiàn)在購買我公司產(chǎn)品的話還是會送雨傘哦！剛剛開學(xué)，在活動期間早點為實驗而準(zhǔn)備吧。上海恒遠(yuǎn)真的非常感謝您的支持！

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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